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吸光光度法測定的是顯色反應達到平衡后溶液的吸光度，因此要得到準確的結果，必須從研究平衡著手，了解影響顯色反應的因素，控制適當?shù)臈l件，使顯色反應和穩(wěn)定。

1）根據(jù)溶液平衡原理，有色絡合物的穩(wěn)定常數(shù)越大，顯色劑過量越多，越有利于待測組分形成有色絡合物。但是過量顯色劑的加入有時會引起副反應，對測定反而不利。

2）酸度對顯色反應的影響是多方面的。一種金屬離子與某種顯色劑反應的適宜酸度范圍是通過實驗來確定的。確定的方法是固定待測組分及顯色劑的濃度，改變?nèi)芤簆H值，測定其吸光度，作出吸光度-pH值關系曲線，選擇曲線平坦部分對應的pH值作為測定條件。

3）顯色反應一般在室溫下進行，有的反應需要加熱，以加速顯色反應，使之進行反應。

4）大多數(shù)顯色反應需要經(jīng)過一定的時間才能完成，其長短與溫度的高低有關，也會受到空氣的氧化或發(fā)生光化學反應使眼色顏色減弱。因此必須通過實驗作出在一定溫度下的吸光度-時間關系曲線，得到適宜的顯色時間。

分光光度計在使用前，使用者應該首先了解該儀器的結構和工作原理，以及各個操縱旋鈕之功能。在未按通電源之前，應該對儀器的安全性能進行檢查，電源接線應牢固，通電也要良好，各個調(diào)節(jié)旋鈕的起始位置應該正確，然后再按通電源開關。